Ako často sa medzi jedlami cítite rozrušený, ľahko rozrušený a nervózny? Ako často sa spoliehate na kávu, aby ste sa udržali v chode? Ako často máte problémy so sústredením sa pred jedlom? Zápal je nevyhnutnou reakciou ľudského tela. Spúšťa ho imunitný systém, aby nás chránil pred zranením, infekciou a/alebo chorobou. Čo sa však stane, ak je v ľudskom tele príliš veľa zápalov? A čo sa stane, ak je v mozgu príliš veľa zápalu?   Neurozápal môže spôsobiť rôzne zdravotné problémy, ako je úzkosť, stres, depresia, mozgová hmla, únava a dokonca letargia, okrem iných dobre známych symptómov. Našťastie existuje jeden prírodný liek, ktorý môže pomôcť ohromne znížiť zápal a zlepšiť funkciu mozgu. Podľa výskumných štúdií môže kurkumín pomôcť v boji proti neurozápalom. Účelom nižšie uvedeného článku je diskutovať o protizápalových účinkoch kurkumínu na mikroglie, zdravie mozgu a wellness.  

Protizápalové účinky kurkumínu v mikrogliálnych bunkách

 

abstraktné

Kyselina lipoteichoová (LTA) indukuje neurozápalové molekuly, ktoré prispievajú k patogenéze neurodegeneratívnych ochorení. Preto by sa supresia neurozápalových molekúl mohla vyvinúť ako terapeutická metóda. Hoci predchádzajúce údaje podporujú imunomodulačný účinok kurkumínu, základné signálne dráhy sú do značnej miery neidentifikované. Tu sme skúmali protineurozápalové vlastnosti kurkumínu v mikrogliálnych bunkách BV-2 stimulovaných LTA. Zápalový cytokínový tumor nekrotizujúci faktor-? Sekrécia [TNF-a, prostaglandínu E2 (PGE2) a oxidu dusnatého (NO] v mikrogliálnych bunkách indukovaných LTA bola inhibovaná kurkumínom. Kurkumín tiež inhiboval LTA indukovateľné NO syntázy (iNOS) a cyklooxygenázu-2 (COX-2) Následne naše mechanické štúdie odhalili, že kurkumín inhiboval LTA-indukovanú fosforyláciu mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAPK) vrátane ERK, p38, Akt a translokáciu NF-?B. Okrem toho kurkumín indukoval hemeoxygenázu (HO)-1HO- 1 a expresia nukleárneho faktora erytroidného 2-príbuzného faktora 2 (Nrf-2) v mikrogliálnych bunkách. Inhibícia HO-1 zvrátila inhibičný účinok HO-1 na zápalové mediátory uvoľňované v mikrogliálnych bunkách stimulovaných LTA. Celkovo naše výsledky naznačujú že kurkumín by mohol byť potenciálnym terapeutickým činidlom na liečbu neurodegeneratívnych porúch prostredníctvom potlačenia neurozápalových reakcií.� Kľúčové slová: kurkumín, neurozápal, TLR2, HO-1, mikrogliálne bunky  

úvod

Chronický neurozápal hrá dôležitú úlohu pri rôznych neurodegeneratívnych ochoreniach, vrátane AD, Parkinsonovej choroby (PD), Huntingtonovej choroby (HD), mŕtvice, amyotrofickej laterálnej sklerózy (ALS) a roztrúsenej sklerózy (MS) (Spangenberg a Green, 2017). Neurozápal je interesovaný aktiváciou mikroglií, primárnych efektorových buniek a rezidentných imunitných buniek CNS (Nakagawa a Chiba, 2015). Mikrogliálne bunky môžu byť aktivované v reakcii na smrť neurónov alebo poškodenie neurónov vyvolané neurozápalovými reakciami alebo extracelulárnymi toxínmi, ako sú baktérie a patogény (Larochelle et al., 2015). Pri neurozápale aktivovaná mikroglia uvoľňuje rôzne druhy cytokínov, chemokínov, reaktívnych foriem kyslíka a reaktívnych foriem dusíka na rozvoj a udržiavanie zápalových reakcií (Moss a Bates, 2001). Nadmerná produkcia týchto zápalových mediátorov môže spôsobiť poškodenie neurónov a smrť. Nahromadené dôkazy naznačujú, že kontrola aktivácie mikroglií by mohla zmierniť závažnosť neurodegeneratívneho ochorenia (Perry et al., 2010). Preto by vývoj protineurozápalových činidiel na inhibíciu mikrogliálnej aktivácie mohol byť prospešný pri liečbe neurodegeneratívnych ochorení.   Mikroglie exprimujú receptory rozpoznávania vzorov (PRR), ktoré sa môžu viazať na molekulárne vzory spojené so vzormi (PAMP) a molekulárne vzorce spojené s poškodením (DAMP), ako sú lipopolysacharid (LPS) a kyselina lipoteichoová (LTA), v tomto poradí (Jack a kol., 2005 ). TLR, hlavná trieda PRR, hrajú kľúčovú úlohu v obrane hostiteľa tým, že indukujú vrodené imunitné reakcie. Štúdie čoraz viac naznačujú, že agonista TLR2 LTA sa podieľa na patogenéze infekčných ochorení CNS a môže vyvolať poškodenie neurónov (Neher et al., 2011). Inhibícia aktivácie TLR2 zoslabuje aktiváciu mikrogliálnych buniek a amyloid? akumuláciu v mozgu (McDonald et al., 2016; Hossain et al., 2017). Transdukcia signálu cez TLR2 je sprostredkovaná rôznymi adaptorovými proteínmi, vrátane MyD88, ktorý podporuje downstream signalizáciu prostredníctvom MAPK a aktivácie NF-kB, čo vedie k expresii zápalových mediátorov (Larochelle et al., 2015).   Zápalové a oxidačné molekuly sú veľmi silnými aktivátormi Keap-Nrf2 (faktor 2 súvisiaci s NF-E2), ktorý indukuje expresiu detoxikačných enzýmov fázy II, aby sa prispôsobili stavu oxidačného stresu (Rojo et al., 2010). Nrf2 zvyčajne pôsobí v neaktívnej forme. Po stimulácii sa Nrf2 oddelí od Keap1 a premiestni sa do jadra, kde sa naviaže na prvok antioxidačnej odozvy (ARE), aby sa aktivovala transkripcia antioxidačných génov na cytoprotekciu (Ma, 2013; Cho et al., 2015). Jedným z génov regulovaných Nrf2 je hemová oxygenáza-1 (HO-1), ktorá má vo svojej promótorovej oblasti sekvenciu ARE. Nedávno sa uvádza, že HO-1 je prevládajúcim faktorom pri kontrole oxidačného stresu a zápalových reakcií pri neurodegeneratívnych ochoreniach (Schipper et al., 2009). HO-1 je prvý indukovateľný enzým obmedzujúci rýchlosť pri degradácii hému na vedľajšie produkty. HO-1 môže poskytovať neuroprotekciu alebo neurotoxický účinok kvôli rovnováhe medzi priaznivými a toxickými účinkami hému a hémových produktov (Mancuso et al., 2010). Ukázalo sa, že jeden vedľajší produkt HO-1, bilirubín, chráni neuróny pred oxidačným stresom in vivo a in vitro. Bilirubín môže byť oxidovaný na biliverdin vychytávaním peroxylových radikálov (Chen, 2014). Predpokladá sa, že HO-1, biliverdin a CO majú protizápalové vlastnosti (Jazwa a Cuadrado, 2010). Ďalšia štúdia naznačila, že myši bez HO-1 boli citlivé na prozápalové stimuly a vyvinul sa u nich chronický zápal v dôsledku znížených hladín železa (Chora et al., 2007). Okrem toho nedávna štúdia naznačila, že up-regulácia dráh Nrf2 a HO-1 významne inhibovala zápalovú reakciu v aktivovaných mikrogliách (Kim et al., 2016). Nrf2 inhiboval mikrogliálnu hyperaktiváciu potlačením p38 MAPK a signálnej dráhy NF-KB (Kim BW a kol., 2013). Ukázalo sa, že knockdown Nrf2 u myší je precitlivený na neurozápal, čo naznačuje zvýšenie zápalových markerov iNOS, IL-6 a TNF-a. (Rojo a kol., 2010). V dôsledku toho sa Nrf2 a HO-1 považovali za dôležité terapeutické ciele pre neurodegeneratívne ochorenia (Koh a kol., 2011; Zhang a kol., 2014).   Kurkumín, hlavný kurkuminoid izolovaný z Curcuma longa L. (kurkuma) sa po stáročia používa v juhovýchodnej Ázii ako liečivo aj ako jedlo (Kunnumakkara et al., 2017). Kurkumín, demetoxykurkumín, bisdemetoxykurkumín, ar-turmerón, a-turmerón a p-turmerón sú hlavné bioaktívne zlúčeniny nachádzajúce sa v C. dlhý. V moderných farmakologických štúdiách C. zložky longa, najmä kurkumín, preukázali sľubné farmakologické aktivity vďaka svojim protineurozápalovým, neuroprotektívnym, chemopreventívnym, imunomodulačným a potenciálne chemoterapeutickým účinkom (Garcia-Alloza et al., 2007; Zhou et al., 2017). Predchádzajúca štúdia ukázala, že kurkumín inhiboval LPS-indukované zápalové reakcie v makrofágoch RAW264.7, čo naznačuje potenciálnu úlohu kurkumínu pri anti-Gram-negatívnej bakteriálnej infekcii (Zhou et al., 2017) a výskum in vivo aj in vitro ukázal že kurkumín vykazuje protizápalové účinky (Garcia-Alloza et al., 2007; Prakobwong et al., 2011; Parada et al., 2015; Li et al., 2016). Okrem toho sa uvádza, že kurkumín podporuje vývoj mikrogliálneho fenotypu M2 spôsobom závislým od HO-1 a znižuje indukciu iNOS, čím chráni mikrogliálne bunky pred oxidačným stresom (Parada et al., 2015). V tejto štúdii sme skúmali, či kurkumín môže ovplyvniť mikrogliálnu aktiváciu indukovanú LTA. Ligand TLR2 LTA je hlavnou zložkou bunkovej steny grampozitívnych baktérií.  

Materiály a metódy

materiály

Kurkumín a ďalšie činidlá boli zakúpené od Sigma (C7727, >80 %, St. Louis, MO, Spojené štáty americké). Protoporfyrín IX (SnPP) a protilátky namierené proti HO-1 (sc-390991) – Nrf2 (sc-722), proteínu viažucemu TATA (TBP; sc-74595), y-tubulínu (sc-134237) a y-aktínu (sc-130065) – boli zakúpené od Santa Cruz Biotechnology, Inc., (Dallas, TX, Spojené štáty americké). Protilátky namierené proti iNOS (13120) – fosforylovaný (p)-MAPK (9910s), MAPK (9926), proteínkináza B (Akt; 4685), p-Akt (13038) a súprava NF-?B dráhy (9936) – boli zakúpené od spoločnosti Cell Signaling Technology, Inc., (Danvers, MA, Spojené štáty americké). LTA bol získaný od InvivoGen (tlrl-pslta, Toulouse, Francúzsko). Okrem toho inhibítor JNK (inhibítor JNK II; 420119), inhibítor Akt (wortmannín; 12-338), inhibítor ERK (PD98059, 513000) a inhibítor p38 (SB230580, 559395) boli zakúpené od spoločnosti EMD Millipore (Billerica, MA, Spojené štáty americké ). Bunkové kultivačné médium, DMEM a fetálne bovinné sérum (FBS) boli zakúpené od Gibco BRL (teraz Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, Spojené štáty americké).  

Bunková kultúra

Myšie BV-2 mikrogliálne bunky boli zakúpené od ATCC. Bunky sa kultivovali v DMEM doplnenom 10 % tepelne inaktivovaným FBS a 0.1 % penicilínom-streptomycínom (BioSource International, Camarillo, CA, Spojené štáty americké) pri 37 °C vo zvlhčenej atmosfére 5 % CO2 a 95 % vzduchu.  

Test bunkovej životaschopnosti

Cytotoxicita kurkumínu bola hodnotená pomocou kolorimetrického testu na báze mikrokultúry [3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazóliumbromid] (MTT). Bunky sa inkubovali v 24-jamkových doštičkách pri hustote 5 � 105 buniek na jamku. Do každej jamky sa pridal MTT roztok (5 ml 5 mg/ml) (konečná koncentrácia 62.5 mg/ml). Po inkubácii počas 3 hodín pri 37 °C v 5 % CO2 sa supernatant odstránil a kryštály formazanu produkované v životaschopných bunkách sa solubilizovali v 150 ml dimetylsulfoxidu (DMSO). Absorbancia každej jamky sa potom odčítala pri 570 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Wallac 1420; PerkinElmer, Inc., Boston, MA, Spojené štáty americké).  

Meranie koncentrácie dusitanov

Syntéza NO v bunkových kultúrach bola meraná Griessovou metódou s mikroplatničkami. Na meranie dusitanov sa 100 ul alikvóty odobrali z upraveného média a inkubovali sa s rovnakým objemom Griessovho činidla [1 % sulfanilamid/0.1 % N-(1-naftyl)-etyléndiamíndihydrochlorid/2.5 % H3PO4] pri teplote miestnosti počas 10 min. Koncentrácia dusitanov bola stanovená meraním absorbancie pri 540 nm pomocou 96-jamkového mikrodoštičkového spektrofotometra Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA, Spojené štáty americké). Ako štandard bol použitý dusitan sodný.  

Meranie TNF-? a PGE2 koncentrácia

Bunky boli inkubované najprv s rôznymi koncentráciami kurkumínu počas 1 hodiny a potom s LTA počas 16 hodín. Po 24-hodinovej inkubácii TNF-a a hladiny PGE2 boli kvantifikované v kultivačnom médiu s použitím súpravy ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) (R&D Systems, Minneapolis, MN, Spojené štáty americké) podľa pokynov výrobcu.  

Príprava jadrového extraktu

Mikrogliálne bunky BV-2 boli trikrát premyté studeným PBS a zozbierané v 3000 ul PBS s použitím centrifugácie pri 800 ug počas 5 minút (4 °C). Bunkové pelety sa suspendovali v pufri A [10 mM HEPES-KOH (pH 7.9); 1.5 mM MgCl2; 10 mM KCI; 0.5 mM ditiotreitol (DTT); 0.2 mM inhibítor proteázy (PI)] a inkubovali sa 5 minút na ľade. Pufor B [10 mM HEPES-KOH (pH 7.9); 1.5 mM MgCl2; 420 mM NaCI; 0.2 mM EDTA; glycerol 25 % v/v; 0.1 mM DTT; 0.2 mM PI] sa pridal do bunkového extraktu a inkuboval sa na ľade počas 5 minút pred centrifugáciou pri 11,000 1 ug počas 4 minúty pri 10 °C. Jadrové proteíny sa extrahovali pridaním úplného lyzačného pufra B [7.9 mM HEPES-KOH (pH 1.5); 2 mM MgCl10; 0.5 mM KCI; 0.2 mM DTT; 25 mM PI; 420 % (hmotn./obj.) glycerínu; 0.2 mM NaCI; 30 mM EDTA] počas 4 minút pri 11,000 °C s občasným premiešaním. Po centrifugácii pri 5 4 µg počas 70 minút pri XNUMX °C sa supernatanty zozbierali a uskladnili pri -XNUMX °C.  

Western Blot Analysis

Bunky BV-2 sa zozbierali v ľadovo studenom lyzovacom pufri (1 % Triton X-100; 1 % deoxycholát; 0.1 % dodecylsulfát sodný). Obsah proteínu v bunkových lyzátoch sa následne stanovil pomocou Bradfordovho činidla (Bio-Rad Protein Assay Kit I5000001; Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, Spojené štáty americké). Celkové proteíny v každej vzorke (50 ug) sa oddelili pomocou 7.5 % SDS-PAGE a preniesli na polyvinylidéndifluoridové membrány. Po blokovaní nešpecifických väzbových miest 5% odtučneným mliekom pri izbovej teplote počas 30 minút boli membrány inkubované s primárnymi protilátkami namierenými proti iNOS (1:500), p-Akt (1:1,000 1), p- MAPK (1,000:1 1,000), MAPK (65:65 1), p-p500, p1 (1,000:1), pI?B?, I?B? (1:1,000 2), HO-1 (1,000:1 3,000), Nrf1 (1,000:1 1), TBP (1.0:1 3,000), ? (16:4 2768), HO-1 (5,000:2371) a aktín (1:5,000 1) počas 20 hodín pri 350 °C. Nasledovala inkubácia s chrenovou peroxidázou konjugovanou protikráličím (sc-XNUMX; XNUMX:XNUMX XNUMX) alebo anti-myším (sc-XNUMX; XNUMX:XNUMX XNUMX) sekundárnymi protilátkami (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) pri izbovej teplote počas XNUMX h. Tubulín sa použil ako kontrola zaťaženia pre každú dráhu. Proteíny sa vizualizovali pomocou vylepšenej chemiluminiscenčnej detekčnej súpravy (GE Healthcare, Chicago, IL, Spojené štáty americké). Po premytí PBS s Tween-XNUMX sa proteínové pásy vizualizovali pomocou Gel Docsed ako kontroly nanášania pre každú dráhu. Proteíny sa vizualizovali pomocou analyzátora Quant XNUMX (GE Healthcare).  

RT-PCR v reálnom čase

Celková RNA bola izolovaná z buniek pomocou izolačnej súpravy RNA spin miniRNA (GE Healthcare, Uppsala, Švédsko) podľa pokynov výrobcu. cDNA bola syntetizovaná z 1 ug celkovej RNA pomocou Maxime RT PreMix (Takara, Gyeonggi-do, Japonsko) a ukotvených oligo-dT15-primérov. PCR v reálnom čase sa uskutočnila pomocou zariadenia Chromo4TM (Bio-Rad) a SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, Spojené štáty americké). Relatívne množstvá cieľovej mRNA sa určili pomocou metódy porovnávacieho prahu (Ct) normalizáciou hodnôt Ct cieľovej mRNA na hodnoty pre a-aktín (Ct). Primárne sekvencie použité v štúdii sú uvedené v tabuľke a1.  

Štatistická analýza

Údaje sú vyjadrené ako priemer (štandardná odchýlka, SD). Každý experiment sa opakoval aspoň trikrát. Štatistická analýza sa uskutočnila pomocou softvéru Statistical Package for GraphPad Prism (verzia 16.0), aby sa určili významné rozdiely. Na analýzy sme použili buď Studentov t-test alebo jednosmernú analýzu rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledovali Dunnove post hoc testy. P-hodnoty < 0.05 sa považovali za štatisticky významné.  

výsledky

Kurkumín neovplyvnil životaschopnosť buniek

Uskutočnili sa experimenty so životaschopnosťou buniek, aby sa určilo, či koncentrácie kurkumínu použité v tejto štúdii ovplyvnili životaschopnosť mikroglií BV2. Obrázok a1 ukazuje, že kurkumín v koncentračnom rozsahu 5-20 uM, spolu s alebo bez 5 ug/ml LTA, nevyvolal cytotoxicitu v BV2 mikrogliách. Preto sme tieto koncentrácie kurkumínu použili na ďalšie štúdium.  

Kurkumín zabránil produkcii neurozápalových molekúl v mikrogliách BV2 aktivovaných LTA

Aby sa preskúmali účinky kurkumínu na sekréciu zápalových cytokínov, bunky BV2 boli ošetrené LTA v prítomnosti a neprítomnosti kurkumínu počas 24 hodín. Kurkumín nebol odstránený pred pridaním LTA. Uvoľňovanie NO, PGE2 a TNF-? boli významne a v závislosti od dávky znížené kurkumínom (obrázky 2A�C). Okrem toho LTA zvýšila expresiu mRNA iNOS a COX-2. Inkubácia s kurkumínom potlačila expresiu mRNA COX-2 a iNOS v mikrogliálnych bunkách BV2 stimulovaných LTA spôsobom závislým od koncentrácie (obrázky 2D, E).  

Aktivácia NF-KB v mikrogliálnych bunkách BV-2 indukovaná kurkumínom

Gény kódujúce expresiu zápalového proteínu v reakcii na mikrogliálnu aktiváciu boli pod kontrolou transkripcie NF-kB. Preto sme skúmali účinok kurkumínu na aktiváciu NF-kB v LTA-stimulovaných mikrogliálnych bunkách. Výsledky ukázali, že LTA vyvolalo charakteristické zvýšenie fosforylácie IkBp. Po predbežnej liečbe kurkumínom sa hladiny pI?B? boli významne znížené spôsobom závislým od koncentrácie (obrázok a3 a doplnkový obrázok S1). V súlade s tým bola jadrová translokácia NF-KB podjednotky p65 indukovaná LTA tiež oslabená predbežným ošetrením kurkumínom. Celkovo možno povedať, že kurkumín pravdepodobne tlmí expresiu neurozápalových molekúl potlačením jadrovej translokácie a aktivácie NF-kB. Ako podporné údaje bola poskytnutá kvantifikácia so štatistickou analýzou.  

Kurkumínom inhibovaná LTA-indukovaná aktivácia p38 a ERK MAPK v mikrogliálnych bunkách BV-2

Okrem NF-kB sú MAPK tiež upstream modulátory neurozápalových molekúl v mikrogliálnych bunkách. Predchádzajúce štúdie ukázali, že kurkumín antagonizoval LPS-indukovanú MAPK fosforyláciu v mikrofágoch (Yang a kol., 2008; Kunnumakkara a kol., 2017). Aby sme zistili, či kurkumín inhibuje neurozápal prostredníctvom regulácie MAPK, skúmali sme jeho účinky na fosforyláciu MAPK indukovanú LTA. Mikrogliálne bunky BV-2 boli vopred ošetrené rôznymi koncentráciami kurkumínu počas 3 hodín a potom boli stimulované LTA počas 1 hodiny. Ako je znázornené na obrázku a4A a doplnkovom obrázku S2, kurkumín inhiboval LTA-indukovanú fosforyláciu ERK, p38 a Akt. Avšak až 20 uM kurkumín neovplyvnilo LTA-indukovanú fosforyláciu JNK. Uvádza sa, že dráha MAPK sprostredkuje produkciu cytokínov, chemokínov a iných neurozápalových molekúl. Preto sme ďalej skúmali úlohu ERK, p38, JNK a Akt v produkcii neurozápalových molekúl buniek BV2 pomocou inhibítorov ERK, p38, JNK a Akt. Avšak iba inhibítor p38 SB203580 významne znížil LTA-indukované uvoľňovanie NO a hladiny expresie mRNA iNOS (obrázky 4B, C). Hoci fosforylácia JNK nebola inhibovaná kurkumínom, JNK inhibítor II významne inhiboval LTA-indukované uvoľňovanie NO (obrázok a4B). Výsledky naznačujú, že signálne dráhy MAPK sa podieľajú na protineurozápalových účinkoch kurkumínu v mikrogliách stimulovaných LTA. Ako podporné údaje sa poskytuje kvantifikácia so štatistickou analýzou.  

Inhibícia signalizácie HO-1 zrušený inhibičný účinok kurkumínu na neurozápalové reakcie

HO-1 pôsobí ako protizápalový a antioxidačný modulátor v mikrogliách (Schipper et al., 2009). Analýza Western blot a RT-PCR ukázala, že kurkumín upreguloval expresiu HO-1 na úrovni proteínu a mRNA, ako je znázornené na obrázkoch 5A�D a doplnkovom obrázku S3. Expresia HO-1 mRNA a proteínu bola maximálne zvýšená v BV-2 mikrogliálnych bunkách ošetrených 20 uM kurkumínom počas 4 hodín, respektíve 8 hodín. Okrem toho kurkumín zvýšil jadrovú translokáciu Nrf2 do 1 hodiny a predĺžil jej stav jadrovej translokácie na 2 hodiny (obrázky 5E, F a doplnkový obrázok S3). Ďalej sme skúmali, či HO-1 indukovaná kurkumínom sprostredkúva protineurozápalovú odpoveď v mikrogliálnych bunkách BV-2 stimulovaných LTA. Bunky sme ošetrili inhibítorom HO-1 SnPP. Potom sme vyhodnotili účinok kurkumínu na LTA-indukované NO a TNF-? uvoľniť. Liečba SnPP významne potlačila kurkumínom sprostredkovanú inhibíciu uvoľňovania NO a TNF-a (obrázky 5G, H). Celkovo tieto výsledky odhaľujú, že aktivácia signálu HO-1 a Nrf-2 závislá od kurkumínu hrá kľúčovú úlohu pri znižovaní neurozápalových reakcií. Ako podporné údaje sa poskytuje kvantifikácia so štatistickou analýzou.  

Diskusia

Uvádza sa, že mikroglie, hlavné rezidentné makrofágy CNS, sú hlavnými efektorovými bunkami pri sprostredkovaní neurozápalu a selektívnej smrti neurónov (Perry et al., 2010). Mikrogliálne bunky zvyšujú produkciu neurozápalových molekúl po expozícii aktivátorom, ako je LPS a LTA, prostredníctvom ich povrchových receptorov, TLR4 a TLR2, v tomto poradí (Perry a Holmes, 2014; Hossain et al., 2017). Zvýšená expresia a aktivácia TLR2 je spojená s progresiou neurodegeneratívnych ochorení, ako je PD a demencia (Dzamko et al., 2017). Napríklad aktivácia TLR2 by mohla upregulovať a-synukleín v mozgoch PD a hrať dôležitú úlohu v patogenéze mozgu PD (Roodveldt et al., 2013). Okrem toho Kim C. et al. (2013) tiež ukázali, že neurodegenerácia bola oslabená buď knockoutom alebo knockdownom TLR2 v modeloch PD hlodavcov. Takže kontrola aktivácie mikroglie a neurotoxicity sprostredkovanej TLR2 bola navrhnutá ako dôležitý terapeutický prístup k liečbe neurodegeneratívnych ochorení. Potenciálnym činidlom v tomto procese by mohol byť kurkumín, o ktorom sa preukázalo, že má neuroprotektívne a protizápalové účinky v rôznych experimentálnych modeloch (Parada et al., 2015; Li et al., 2016). Kurkumín je vysoko lipofilná prírodná zlúčenina. Predchádzajúca štúdia dobre preukázala, že kurkumín je schopný prekonať hematoencefalickú bariéru a že sa koncentruje hlavne v hipokampe v mozgu (Tsai et al., 2011). Niektoré štúdie uviedli, že kurkumín inhiboval poškodenie neurónov vyvolané HIV-1 gp120 a poskytoval protineurozápalové účinky v mikrogliách indukovaných LPS (Gong et al., 2012). Zdá sa, že tento ochranný účinok kurkumínu závisí od jeho protizápalových účinkov. Kurkumín by mohol chrániť neuróny pred neurotoxicitou sprostredkovanou mikrogliami, pričom by sa stal neúčinným v podmienkach vyčerpania mikroglií (Park a kol., 2001; Yang a kol., 2008; Parada a kol., 2015). Podobné štúdie na periférnych bunkách ukázali aj protizápalové účinky kurkumínu. S použitím myších makrofágov RAW 264.7 štúdie ukázali, že kurkumín inhiboval PGE2, NO a TNF-? uvoľnenie po stimulácii LPS (Pae et al., 2008). Účinky kurkumínu na TLR2-indukovaný neurozápal v mikrogliálnych bunkách však nie sú úplne pochopené.   Regulácia signálnych dráh v aktivovaných mikrogliách je dôležitá pri udržiavaní homeostázy CNS, pretože deregulované neurozápalové reakcie môžu viesť k smrti susedných neurónov uvoľnením zápalových molekúl, ako sú cytokíny, chemokíny, NO a ROS (Perry a Holmes, 2014; Spangenberg a Green, 2017). Napríklad nadmerná syntéza NO pod endotoxínmi vedie k tvorbe reaktívnych foriem dusíka a smrti neurónových buniek (Perry et al., 2010). Ukázalo sa tiež, že PGE2 prispieva k smrti neurónov prostredníctvom aktivácie dráhy MAPK/ERK v mikrogliách (Xia et al., 2015). V tejto štúdii sme ukázali, že kurkumín inhiboval sekréciu zápalových mediátorov TNF-a, NO a PGE2 a expresiu iNOS a COX-2 v mikrogliách BV2 stimulovaných LTA. Ďalej sme ukázali, že kurkumín zmiernil tieto účinky LTA bez toho, aby zmenil prežitie buniek, čo naznačuje, že kurkumín je bezpečný a možno ho považovať za potenciálne terapeutické činidlo pri neurozápaloch.   NF-kB je hlavný transkripčný faktor, ktorý hrá rozhodujúcu úlohu pri regulácii redoxnej homeostázy. NF-?B sa považuje za hlavný regulátor mikrogliálnych zápalových reakcií na poškodenie neurónov (Acharyya et al., 2007). Nedávne štúdie ukázali, že aktivácia NF-kB riadila expresiu zápalových molekúl, ako sú NO, PGE2 a TNF-a, a produkciu IL-1b (Acharyya et al., 2007). Preto sa modulácia aktivácie NF-kB považuje za kritický spôsob kontroly mikrogliálnej aktivácie. Aktivácia NF-kB signálnej dráhy je sprostredkovaná IkB proteínom. Fosforylácia IkB vedie k disociácii NF-kB, čo vedie k indukcii zápalových mediátorov. V tejto štúdii sa ukázalo, že kurkumín spôsobil duálnu inhibíciu fosforylácie a degradácie IkBp, ako aj jadrovú translokáciu p65, čo naznačuje, že toto činidlo by mohlo stabilizovať NF-kB v mikrogliálnej cytoplazme po stimulácii LTA v BV -2 mikrogliové bunky.   V cicavčích bunkách signálne dráhy MAPK, vrátane ERK, JNK a p38, prispievajú k produkcii širokého spektra neurozápalových mediátorov (Chantong et al., 2014). V tejto štúdii predbežná liečba kurkumínom znížila fosforyláciu p38 a ERK. Okrem toho inhibítor p38 SB203580 významne znížil sekréciu NO a expresiu mRNA kľúčového prozápalového génu, iNOS. Tieto výsledky naznačujú, že kurkumín inicioval protineurozápalové účinky v mikrogliálnych bunkách BV-2 stimulovaných LTA, čiastočne prostredníctvom inhibície aktivácie p38 MAPK. Signálna dráha závislá od PI3K/Akt podporuje zápalové reakcie v mikrogliách. Zapojenie Akt dráhy bolo preukázané pri expresii zápalových mediátorov v mikrogliách prostredníctvom aktivácie NF-?B v mikrogliách (Lo et al., 2015). Kurkumín potláčal fosforylovaný Akt, downstream cieľ PI3K. Inhibítor PI3K wortmannín však nevykazoval žiadny inhibičný účinok na sekréciu NO alebo expresiu mRNA iNOS. Celkovo tieto údaje naznačujú, že protineurozápalový účinok kurkumínu sa vyskytuje hlavne prostredníctvom inhibície signalizácie NF-kB a MAPK.   Identifikovali sme tiež intracelulárnu dráhu, ktorá negatívne reguluje expresiu zápalových molekúl v mikrogliálnych bunkách. Nrf2 je redox-senzitívny transkripčný faktor, ktorý reguluje mikrogliálne zápalové reakcie na infekcie mozgu. Účinok Nrf2 bol opísaný v rôznych modeloch in vivo, kde knockdown Nrf2 u myší zvýšil zraniteľnosť voči astme alebo emfyzému (Ma, 2013). Okrem toho agonista TLR2 / TLR4 podporoval zápalové reakcie u myší Nrf2 KO v porovnaní s myšami WT (Kong et al., 2011). V súčasnej štúdii sme ukázali, že kurkumín zvýšil expresiu Nrf2 a jeho downstream proteínu HO-1. HO-1 je kľúčová signálna molekula, ktorá sa podieľa na regulácii zápalových a oxidačných reakcií. Gén HO-1 má vo svojej promótorovej oblasti sekvenciu ARE, ktorá je väzbovým miestom pre transkripčný faktor Nrf2. Niekoľko štúdií navrhlo, že NF-kB prerušuje signálnu dráhu Nrf-2-ARE, pretože mnohé zlúčeniny, ktoré indukovali signalizáciu HO-1 a Nrf2, náhodne potlačili aktiváciu NF-kB (Li et al., 2016). Expresia HO-1 bola nevyhnutná pre mikrogliálny špecifický cytoprotektívny účinok (Parada et al., 2015). Niekoľko štúdií tiež ukázalo inverznú koreláciu medzi HO-1 a sekréciou zápalového mediátora (Chora et al., 2007; Parada et al., 2015). V zhode sme pozorovali, že samotný kurkumín indukoval expresiu HO-1 v mikrogliálnych bunkách.  

záver

Táto štúdia preukázala, že kurkumín má protizápalovú aktivitu v mikrogliálnych bunkách stimulovaných LTA, ktorá môže inhibovať aktiváciu NF-kB a p38 MAPK a môže indukovať expresiu Nrf2 a HO-1 (obrázok a6). Okrem toho kurkumín nemá cytotoxické účinky na mikrogliálne bunky BV-2 v jeho protizápalovej dávke. Kurkumín môže mať terapeutický potenciál pre niektoré poruchy spojené s neurozápalmi spôsobenými grampozitívnymi baktériami.   �

Kurkumín alebo kurkuma je silný protizápalový prostriedok, o ktorom sa preukázalo, že má mnoho zdravotných výhod. Kurkumín, považovaný za antioxidant s protirakovinovými, antidepresívnymi a anti-aging vlastnosťami, dokáže oveľa viac než len hojiť rany a zlepšovať pamäť. Podľa výskumných štúdií môže kurkumín alebo kurkuma pomôcť znížiť zápaly nervov alebo mozgu. Tento silný protizápalový prostriedok môže blokovať produkciu prozápalových cytokínov a podporovať celkovú pohodu. – Dr. Alex Jimenez DC, CCST Insight

 

---

 

Formulár hodnotenia neurotransmiterov

[wp-embedder-pack width=”100%” height=”1050px” download=”all” download-text=”” attachment_id=”72741″ /] Nasledujúci formulár na hodnotenie neurotransmiterov je možné vyplniť a predložiť Dr. Alexovi Jimenez. Príznaky uvedené v tomto formulári nie sú určené na to, aby sa použili na diagnostiku akéhokoľvek typu ochorenia, stavu alebo iného typu zdravotného problému.  

---

  Na počesť vyhlásenia guvernéra Abbotta je október Mesiacom chiropraktického zdravia. Naučiť sa viac o návrh.   Ako často sa medzi jedlami cítite rozrušený, ľahko rozrušený a nervózny? Ako často sa spoliehate na kávu, aby ste sa udržali v chode? Ako často máte problémy so sústredením sa pred jedlom? Zápal je dôležitou reakciou ľudského tela. Je aktivovaný imunitným systémom, aby nás chránil pred zranením, infekciou a/alebo chorobou. Čo sa však stane, ak je v ľudskom tele príliš veľa zápalov? A čo sa stane, ak je v mozgu príliš veľa zápalu? � Zápal mozgu môže okrem iných bežných symptómov spôsobiť rôzne zdravotné problémy, ako je úzkosť, stres, depresia, mozgová hmla, únava a dokonca letargia. Našťastie existuje jeden prírodný liek, ktorý môže výrazne pomôcť znížiť zápal neurónov a zlepšiť funkciu mozgu. Podľa výskumných štúdií môže kurkumín bojovať proti zápalu mozgu. Účelom vyššie uvedeného článku bolo diskutovať o protizápalových účinkoch kurkumínu na mikroglie a mozgovú pohodu. Na nasledujúci článok sa odkazuje z Národné centrum pre biotechnologické informácie (NCBI). Rozsah našich informácií je obmedzený na chiropraktické, muskuloskeletálne a nervové zdravotné problémy alebo články, témy a diskusie o funkčnej medicíne. Funkčné zdravotné protokoly využívame na liečbu úrazov alebo porúch pohybového aparátu. Ak chcete ďalej prediskutovať vyššie uvedenú tému, neváhajte sa opýtať Dr. Alexa Jimeneza alebo nás kontaktujte na adrese 915-850-0900 .   Kurátorom je Dr. Alex Jimenez  

---

 

Ďalšia téma diskusie: Chronická bolesť

Náhla bolesť je prirodzenou reakciou nervového systému, ktorá pomáha demonštrovať možné zranenie. Napríklad signály bolesti prechádzajú z poranenej oblasti cez nervy a miechu do mozgu. Bolesť je vo všeobecnosti menej závažná, keď sa zranenie lieči, avšak chronická bolesť je iná ako priemerný typ bolesti. Pri chronickej bolesti bude ľudské telo naďalej vysielať signály bolesti do mozgu bez ohľadu na to, či sa zranenie zahojilo. Chronická bolesť môže trvať niekoľko týždňov až niekoľko rokov. Chronická bolesť môže výrazne ovplyvniť mobilitu pacienta a môže znížiť flexibilitu, silu a vytrvalosť.    

---

 

Neural Zoomer Plus pre neurologické ochorenie

Dr. Alex Jimenez využíva sériu testov na pomoc pri hodnotení neurologických ochorení. Neurónový zoomer^TM Plus je súbor neurologických autoprotilátok, ktoré ponúkajú špecifické rozpoznávanie protilátok proti antigénu. Vibrantný nervový zoomer^TM Plus je navrhnutý tak, aby zhodnotil reaktivitu jednotlivca na 48 neurologických antigénov s prepojením na rôzne neurologicky súvisiace ochorenia. Vibrantný nervový zoomer^TM Plus si kladie za cieľ znížiť neurologické stavy tým, že pacientom a lekárom poskytne životne dôležité zdroje na včasnú detekciu rizík a zvýšené zameranie na personalizovanú primárnu prevenciu.  

Vzorce na podporu metylácie

 

XYMOGEN Exkluzívne profesionálne receptúry sú dostupné prostredníctvom vybraných licencovaných odborníkov v oblasti zdravotnej starostlivosti. Internetový predaj a zľavy na receptúry XYMOGEN sú prísne zakázané.

 

Hrdo,�Doktor Alexander Jimenez sprístupňuje receptúry XYMOGEN iba pacientom v našej starostlivosti.

 

Zavolajte prosím do našej kancelárie, aby sme vám pridelili lekársku konzultáciu na okamžitý prístup.

 

Ak ste pacientom Lekárska a chiropraktická klinika úrazov, o XYMOGEN sa môžete opýtať telefonicky 915-850-0900.   Pre vaše pohodlie a prehľad XYMOGEN produkty, pozrite si nasledujúci odkaz. *XYMOGEN-Katalóg-Stiahnuť ▼   * Všetky vyššie uvedené zásady spoločnosti XYMOGEN zostávajú prísne v platnosti.  

---